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微生物限度检查法的供试液制备方法有哪些
发布时间:2014-11-06   点击次数:4829次

     微生物限度检查法必须用到供试液,那么如何制备供试液呢?可根据供试品的理化特性与生物学特性,采取适宜的方法制备供试液,常用的供试液制备方法如下:
    一、液体供试品
       取供试品10ml,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀,作为1:10的供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。

    二、固体、半固体或黏稠性供试品 
        取供试品10g,加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,用匀浆仪或其他适宜的方法,混匀,作为1:10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80,并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。

    三、需用特殊供试液制备方法的供试品
     1、非水溶性供试品
       方法1:取供试品5g(5ml),加入含溶化的(温度不超过45℃)5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中,用无菌玻棒搅拌成团后,慢慢加入45℃左右的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,边加边搅拌,使供试品充分乳化,作为1:20的供试液。
       方法2:取供试品10g,加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯(制法见附录XIII B无菌检查法中供试品的无菌检查项下)和无菌玻璃珠的适宜容器中 ,必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量,充分振摇,使供试品溶解。然后加入45℃的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,振摇5~10分钟,萃取,静置使油水明显分层,取其水层作为1:10的供试液。
     2、膜剂供试品
      取供试品100cm2,剪碎,加50ml或100ml的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(必要时可增加稀释液),浸泡,振摇,作为1:10或1:20的供试液。
     3、肠溶及结肠溶制剂供试品
      取供试品10g ,加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液(用于肠溶制剂)PH7.6无菌磷酸盐缓冲液(用于结肠溶制剂)至100ml,置45℃水浴中,振摇,使溶解,作为1:10的供试液。
     4、气雾剂、喷雾剂供试品
       取规定量供试品,置冰冻室冷冻约1小时,取出,迅速消毒供试品开启部位,用无菌钢锥在该部位钻一小孔,放至室温,并轻轻转动容器,使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器吸出全部药液,加至适量的PH7.0无菌氯化钠-蛋

白胨缓冲液(若含非水溶性成分,加适量的无菌聚山梨酯80)中,混匀,取相当于10g或10ml的供试品,再稀释成1:

10的供试液。
     5、具抑菌活性的供试品
      当供试品有抑菌活性时,应消除供试液的抑菌活性后,再依法检查。
     (1)培养基稀释法:取规定量的供试液,至较大量的培养基中,使单位体积内的供试品含量减少,至不含抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时,取同稀释级的供试液2ml,每1ml供试液可等量分注多个平皿,倾注琼脂培养基,混匀,凝固,培养,计数。每1ml供试液所注的平皿中生长的菌数之和即为1ml的菌落数,计算每1ml供试液的平均菌落数,按平皿法计数规则报告菌数;控制菌检查时,可加大增菌培养基的用量。
     (2)离心沉淀集菌法:取一定量的供试液,3000转/分离心20分钟(供试液如有沉淀,先以500转/分离心5分钟,取全部上清液再离心),弃去上清液,留底部集菌液约2ml,加稀释液补至原量。
     (3)薄膜过滤法:见细菌、霉菌及酵母菌计数项下的“薄膜过滤法”。
      (4)中和法:凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试品,可用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分。中

和剂或灭活剂可加在所用的稀释液或培养基中。


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